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了解PCR基因扩增的基本过程和日常维护注意事项

点击次数:528 发布时间:2019-11-07
PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)是一种在体外特异性扩增靶DNA序列的的技术,通过多个循环的变性、退火和延伸,能够使微量的遗传物质在几小时内得到几百万倍的扩增。适用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。

PCR基因扩增基本过程为变性、退火和延伸,这三步需要不同的温度条件。
 
DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA
退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。
 
PCR仪日常维护保养要注意:
 
1、样品池的清洗
先打开盖子,然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡样品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液体,用棉签吸干剩余液体,设定保持温度为50℃的PCR程序并使之运行,让残余液体挥发去除,一般5~10min即可。
 
2、热盖的清洗
对于荧光定量基因扩增仪,当有荧光污染出现,而且这一污染并非来自样品池时,或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时,需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面,确保样品池的孔干净,无污物阻挡光路。
 
3、仪器外表面的清洗
清洗基因扩增仪的外表面可以除去灰尘和油脂,但达不到消毒的效果,选择没有腐蚀性的清洗剂对基因扩增仪的外表面进行清洗。
 
4、更换保险丝
先将基因扩增仪关机,拔去插头,打开电源插口旁边的保险盒,换上备用的保险丝,观察是否恢复正常。
 
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