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使用PCR仪进行扩增全程都应谨慎认真

点击次数:529 发布时间:2019-10-28
PCR仪也叫基因扩增仪,它是利用PCR技术对特定基因做试管内的大量合成,也就是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。
 
尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
 
1、戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
2、使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
3、避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
4、操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的度;
5、后加入反应模板,加入后盖紧反应管;
6、操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
7、尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,建议使用可替换或高压处理的加样器。
如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
8、重复实验,验证结果,慎下结论。
 
 
 
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